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產品型號：
更新時間：2025-07-02
廠商性質：代理商
訪問量：8615
服務熱線01084640949
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天狼猩紅總膠原檢測試劑盒
Sirius Red Total Collagen Detection Assay Kit（Catalog # 9062）
僅用于科研，不可用于診斷
背景簡介：
天狼星紅是一種*的染料，它與纖維性膠原（I型至V型）上的[Gly-X-Y]n螺旋結構特異性結合，不區分膠原蛋白種類和膠原類型，因此用于總膠原的檢測。Chondrex提供天狼星紅總膠原蛋白檢測試劑盒，用于檢測樣本，包括：組織、細胞培養液和細胞中的總膠原蛋白。該試劑盒可檢測40例樣本（復孔），實驗時間少于30min。由于細胞培養液總的膠原含量較低，可能需要對樣本做濃縮處理。
產品說明：
產品描述：用于檢測樣本中的總膠原
形式：96孔可拆版
檢測方法：比色法
實驗時間：30min
檢測范圍：500 µg/ml to 8 µg/m
檢測數量：40（復孔）樣本/板
樣本類型：組織勻漿、細胞培養液、細胞
樣本稀釋比：根據樣本類型而定
發色團：N/A(510-550nm讀取)
保存：-20℃ 保存12個月
試劑盒組成：
組分 | 數量 | 規格 | 保存溫度 |
標準品-牛II型膠原（90621） | 1 | 0.5 mg/ml, 1 ml | -20°C |
天狼猩紅溶液（90622） | 1 | 50 ml | -20°C |
洗液（90623） | 1 | 50 ml | -20°C |
提取液（90624） | 1 | 30 ml | -20°C |
0.5M醋酸（10X醋酸）（90625） | 1 | 20ml | -20°C |
96孔板（9026） | 1 | 8-well strips x 12 | -20°C |
注：1）洗液，提取液，0.5M的醋酸和96孔板也可以室溫保存
2）用于細胞培養液樣本的的濃縮液（50 ml, Catalog # 90626)）不包括在盒子內，需要單獨訂購。
樣本制備：
可用于檢測組織勻漿樣本和細胞。固體樣本需要溶解后檢測。此外，細胞培養液需要做濃縮處理（請參照第三頁實驗步驟）。另外，熱變性的膠原對天狼猩紅的結合性差，會導致結果值偏低。
依據溶解緩沖液的不同，以下膠原樣本可用于檢測：
中性緩沖液溶解的膠原溶液（0.15mol/L NaCl in 0.1M Tris-HCl, pH 7.4）
醋酸溶解的膠原溶液（0.05mol/L的醋酸）
含胃蛋白酶的膠原溶液（0.05mol/L的醋酸，含胃蛋白酶）
Chondrex 推薦“制備含胃蛋白酶的可溶液膠原溶液"制備方案
細胞培養液樣本制備：
含高濃度血清的細胞培養物會導致高背景值。因此，我們推薦用PBS降低細胞培養物中的血清濃度到5%。
樣本濃縮：
細胞培養物中的血清濃度一般來說很低，因此用試劑盒直接檢測細胞培養物中的膠原很難檢測得到。Chondrex公司通過濃縮液（Cat # 90626)參照樣本濃縮流程對樣本進行濃縮。如果檢測細胞培養物，請設置陰性對照，用濃縮液的話可能會導致背景升高。
加入1ml細胞培養液
加入250ul濃縮緩沖液
渦旋混勻后，4℃孵育16-24小時
10000rpm離心3min
棄上清液
加入100ul 0.05mol/L的醋酸溶解沉淀物。用溶解后的樣本，作為檢測樣本。
樣本中膠原濃度為測定值x0.1。
操作流程：
加入100ul稀釋后的標準品和樣本到管內。
加入500ul天狼猩紅溶液到管內
混勻后，室溫孵育20min,10000rmp離心3min,小心吸取上清，并棄上清。
加入250ul提取液到各管內。
渦旋混勻使沉淀物*溶解。
從各管內取200ul到檢測板
讀取530nm(510-550nm)吸光度
注意：
推薦標準品和樣本均做復孔檢測
所有的緩沖液在用前置于室溫平衡。
用移液管準確定量緩沖液體積，提供的緩沖液都是足量的。
如果一次用不完的原液試劑，請還在原瓶內-20℃保存，用于后續實驗。
試劑盒含有未感染的動物的動物組分，丟棄請做生物安全處理。
實驗流程：
1X醋酸溶液制備：用雙蒸水，制備足夠的1X醋酸溶液（0.05M）。
標準品制備：用1.5ml離心管或者細胞培養管制備標準品溶液，加入250ul 0.05mol/L的醋酸（空白）到7管內。加入250ul標準品（500ug/ml）和等體積的0.05mol/L的醋酸混合（250ug/ml）。一次重復此步驟，制備：125,63,31.5,16，和8ug/ml標準品溶液
樣本制備：用1.5ml離心管或者細胞培養管制備樣本溶液。如果樣本中的膠原濃度范圍不確定，需要用0.05mol/L的醋酸溶液做系列稀釋后，確定樣本大概范圍后再檢測。
加入樣本和標準品：加入100ul ,空白，稀釋后的標準品和樣本到離心管內，做復管。
加入天狼猩紅溶液：加入500ul天狼猩紅溶液到各管。渦旋混勻，室溫孵育20min。
離心：10000rpm離心3min。去除上清，不要接觸底部的沉淀物。如果不小心接觸到，重新離心，小心去除上清。
加入洗液：加入500ul洗液到各管。渦旋混勻后，重懸沉淀物。
離心：10000rpm離心3min。去除上清，不要接觸底部的沉淀物。如果不小心接觸到，重新離心，小心去除上清。
加入提取液：加入250ul提取液到各管。渦旋混勻后，充分溶解。
讀數：從各管取200ul到96孔板。讀取510-550nm的吸光度值。
結果計算：
計算標準品，空白和檢測樣本的OD平均值。
用標準品和樣本OD平均值減去空白OD均值。
Y軸做OD值，X軸做標準品濃度，制作標準曲線。
通過回歸曲線計算樣本濃度。樣本實際濃度應在測值的基礎上乘以相應的稀釋倍數。
如果OD值超出標準品檢測范圍，請對樣本做稀釋后，再檢測。
